a亚洲精品国产精品乱码不99,亚洲一区无码中文字幕不卡,国产欧美日韩综合第一区第二区,五月婷婷激情综合图片

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > CHO-K1倉鼠卵巢細胞株的培養(yǎng)方法

    CHO-K1倉鼠卵巢細胞株的培養(yǎng)方法

    發(fā)布時間: 2024-04-10  點擊次數(shù): 391次

    中國倉鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)細胞是第一個被美國FDA、歐盟EMA和中國CFDA認可的用于生物制藥領(lǐng)域的生產(chǎn)細胞,已廣泛應用于各種治療性蛋白質(zhì)藥物的大規(guī)模制備,包括重組抗體、重組單體蛋白質(zhì)以及重組融合蛋白質(zhì)等。CHO-K1是未經(jīng)改造的野生型CHO細胞。最原始的CHO-K1細胞是貼壁培養(yǎng),并需要添加血清,由于血清的批間穩(wěn)定性問題,及后來病毒安全性問題,無血清懸浮培養(yǎng)成為趨勢。實驗室常以貼壁的CHO K1細胞構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株。

     

                                    圖片


    細胞形態(tài):長梭形(10×倍鏡)
    培養(yǎng)條件:DMEM/F12培養(yǎng)基,胎牛血清終濃度為10%
    培養(yǎng)溫度:37°C

    細胞復蘇:


    1.在攝氏37度的水浴中輕輕攪動,為防止受到污染,不要把O形環(huán)和蓋子放在外面。解凍應迅速(約2分鐘)。
    2.解凍后把凍存管盡快從水中拿出來,用75% 乙醇浸泡或噴灑消毒乙醇。從現(xiàn)在開始所有的操作都應該進行在嚴格的無菌條件下進行。
    3.將細胞懸液轉(zhuǎn)移到含有9 ml(血清)細胞培養(yǎng)基的離心管中,10000 rpm離心5分鐘。
    4.棄上清,用(血清)細胞培養(yǎng)基重懸細胞,轉(zhuǎn)移至T25細胞培養(yǎng)瓶中。
    注意:在T25瓶加入細胞之前,可以先將包含(血清)細胞培養(yǎng)基的容器放入培養(yǎng)箱內(nèi)至少15分鐘,以便培養(yǎng)基達到正常PH(7.0至7.6)。
    5.將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。


    細胞傳代:


    1.棄去培養(yǎng)基,用PBS沖洗兩遍細胞層,以消除所有痕量的血清。
    2.加入2.0 ~ 3.0 mL  0.25%(w/v)胰蛋白酶溶液消化細胞,在倒置顯微鏡下觀察細胞直到細胞層分散。
    注意:為了避免結(jié)塊,請不要通過擊打或搖晃瓶子??稍?7℃培養(yǎng)箱等待細胞,加快細胞分散的速度。
    3.加入6 - 8 mL的(血清)細胞培養(yǎng)基終止消化并反復吹打,轉(zhuǎn)移至離心管,1000 rpm 5 min。
    注意:(血清)細胞培養(yǎng)基里有血清,血清里過量的血清蛋白與胰酶結(jié)合,競爭性抑制,使胰酶無法繼續(xù)消化細胞。
    4.  棄上清,添加新的培養(yǎng)基重懸細胞,向培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿中添加適當?shù)募毎麘腋∫海⒀a充新鮮(血清)細胞培養(yǎng)基。
    5. 將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
    注意:ATCC建議傳代比例為:1:4至1:8。


    細胞凍存:


    1.當細胞處于對數(shù)生長期時,可進行細胞凍存。
    注意:常見的細胞凍存密度是1-10*10^6 cells/mL。
    2.棄去培養(yǎng)基,用PBS沖洗兩遍細胞層,以消除所有痕量的血清和細胞生長過程中產(chǎn)生的廢料。
    3.加入2.0 ~ 3.0 mL 0.25%(w/v)胰蛋白酶溶液消化細胞,在倒置顯微鏡下觀察細胞直到細胞層分散。
    4.加入適量的(血清)細胞培養(yǎng)基終止消化,槍頭反復吹打混勻后將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管,1000 rpm 5 min。
    5.棄上清,依次加入700 μL培養(yǎng)基,200 μL胎牛血清重懸細胞,最后添加 10% DMSO 后梯度降溫凍存。

    注意:DMSO加到細胞里會迅速放熱,對細胞活力造成損傷,因此可以選擇在最后一步添加,加完迅速轉(zhuǎn)移至低溫。

    以上就是本期的內(nèi)容,更多資訊,歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

    安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

    深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O(shè)在廣東,服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務。


    可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術(shù)支持,深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴,安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應商,公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨,配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持,隨時為客戶提供服務。









產(chǎn)品中心 Products
大方县| 桦甸市| 谢通门县| 万山特区| 徐汇区| 汪清县| 泗洪县| 吴桥县| 清远市| 三门县| 江油市| 衡山县| 柘荣县| 上饶市| 海原县| 桑植县| 娱乐| 城固县| 广昌县| 遵义市| 高淳县| 河曲县| 新邵县| 收藏| 凯里市| 方正县| 宁武县| 新平| 黄陵县| 东明县| 柳河县| 肇庆市| 泰兴市| 金寨县| 朔州市| 余姚市| 高密市| 政和县| 东乡族自治县| 宿迁市| 德惠市|