-
昆蟲細胞的擴增
發(fā)布時間： 2022-12-07 點擊次數(shù)： 796次原理
用機械法從細胞單層分離細胞，在 27°C 條件下和懸浮狀態(tài)下進行擴增培養(yǎng)。
材料與儀器
Sf9細胞 二甲基亞砜 Pluronic F68
生長培養(yǎng)液
培養(yǎng)瓶 旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶和磁力攪拌器 27°C培養(yǎng)箱步驟
常規(guī)維持培養(yǎng)
1. 通過刮取法或用培養(yǎng)液沖洗細胞（( ATCC # CRL-1711 ) 或從甘藍環(huán) Trichoplusia ni 獲得的細胞系（Tn 368 或 BTI-TN-5B1-4，也稱 “High Five "，可從 Invitrogen 購買））法使細胞從培養(yǎng)瓶中脫落，或者利用在旋轉(zhuǎn)瓶中懸浮生長的細胞。
2. 用血細胞計數(shù)板計數(shù)細胞，通過用臺盼藍或萘黑染色檢査細胞的活力。
3. 以 0.5~1×106 個/ml 活細胞密度將細胞種植于旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶內(nèi)，每 500 ml 旋轉(zhuǎn)瓶內(nèi)注入 20~100 ml 細胞懸液。
4. 在 20~28°C 條件下培養(yǎng)細胞，以 37°C 為佳。
5. 每 48~72 h 或當細胞密度為 4~5×106 個/ml 時，將細胞稀釋至 0.5~1×106 個/ml。
6. 每 3~4 周將細胞移入潔凈的培養(yǎng)瓶。
7. 如果細胞群聚集，稍微加快攪拌速度，并加入表面活性劑 Pluronic F-68 [ 0.5%~1.0% (v / v ) ]，以降低剪切力。
凍存細胞
1. 計數(shù)細胞，離心（1000 rpm ，約 200 g，5 min )。
2. 用 10% DMSO ( 用 FBS 配制）混懸細胞，密度為 1×107 個/ml。
3. 將細胞分裝入凍存管，然后將凍存管放在冰上 1 h。
4. 將凍存管裝入苯乙烯泡沫容器。
5. 在 -70°C 條件下將凍存管緩慢冷凍過夜（約 1°C /min )。
6. 將凍存管移入液氮凍存器中。
7. 使凍存的細胞復蘇時，將凍存管在 37°C 迅速融化。如果細胞以液相儲存，在融化加蓋容器中的細胞時應(yīng)注意避免因凍存管破裂而導致受傷的危險。
8. 將細胞移入含 5 ml 培養(yǎng)液的 25 cm2 培養(yǎng)瓶。輕拍培養(yǎng)瓶，以便均勻地分散細胞。
9. 2~3 h 后吸去培養(yǎng)液。當大多數(shù)細胞貼壁時，加入 5 ml 新鮮培養(yǎng)液。
10. 在分離前將細胞培養(yǎng) 2~3 天，使細胞恢復。然后按前述方法，將細胞移入攪拌培養(yǎng)瓶或更大的塑料瓶。以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)
- 下一篇：冷胰蛋白酶解離組織
- 上一篇：結(jié)腸直腸腫瘤細胞的培養(yǎng)
銷售熱線
產(chǎn)品中心
Products
技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 地址：深圳市寶安區(qū)新安街道寶民社區(qū)創(chuàng)業(yè)二路5號建設(shè)銀行樓創(chuàng)業(yè)二路5-1 管理登陸 sitemap.xml
微信二維碼
