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    標簽酶消化釋放標簽實驗

    發(fā)布時間: 2022-03-24  點擊次數: 1298次

    材料與儀器

    溶液與緩沖液 LoTE
    Eppendorf 試管

    步驟


    實驗方案 A

    1.向含有 Dynabeads 的每個試管中加入下列物質:

    2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。

    3.時收集上清液(含有釋放的 cDNA 標簽)

    4.用 LoTE 擴容到 200mL。

    5.等體積的 PCI 抽提,乙醇沉淀(實驗方案 A,第 2 步)。

    6.將沖洗和風干后的沉淀重新懸浮于 10 ul LoTE 中。

    實驗方案 B

    1.從 PCR 試管中移去連接反應混合物并用 50ul 洗液洗滌 1 次。

    2.從試管中移去沖洗液,加入 50 ul 的 1X 限制性緩沖液,然后移去限制性緩沖液。

    3.向試管中加入下列物質:

    4.在 65°C 下消化 lh。

    5.加入 175ul 的 LoTE 然后轉移到 1.5 ml 的 Eppendorf 試管中。不要丟棄,因為混合物中含有所釋放的附著于接頭上的 SAGE 標簽。

    6.如上所述,用等體積的 PCI 抽提,乙醇沉淀(實驗方案 A,第 2 步)。

    7.將沖洗和風干后的沉淀重新懸浮于 21.5ul 的 LoTE 中。

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