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電解質梯度測序膠 簡介
發(fā)布時間： 2021-12-15 點擊次數： 1213次原理
通過簡單地提高下槽緩沖液的鹽濃度，使凝膠底部的離子強度得以提高，在電泳過程中，鹽離子可以電泳進入凝膠并產生重復性好的及有效的梯度。
材料與儀器
DNA
TBE 乙酸鈉
電泳儀步驟
1. 按基本方案步驟1~22灌制凝膠及進行預電泳，但上槽緩沖液為0.5×TBE，下槽為1×TBE。
2. 按基本方案步驟23~26步準備樣品及加樣。3. 如需測≤400堿基的序列信息，加入3 mol/l 乙酸鈉于下槽緩沖液至終濃度1 mol/l， 執(zhí)行步驟5。4. 如果需測大于400堿基的序列信息，先按步驟5進行，電泳2~3 h，然后加入3 mol/l 乙酸鈉于下槽至終濃度為1 mol/l。
5. 在60 W 恒功率下電泳。
6. 進行基本方案步驟23~33。同實驗其他方法
變性凝膠電泳實驗
1. 制作每塊凝膠時，首先要用肥皂及水小心嚴格地清洗兩塊30 cm×40 cm的前后玻璃平板，用去離子水沖洗后晾干，用噴射洗瓶噴10%乙酵或異丙醇使平板濕海。 2. 然后用Kimwi
含甲酰胺的測序膠
1. 按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。 2. 按所需濃度配制甲酰胺凝膠溶液，加熱輕輕挽拌使之溶解，冷卻至30℃以下。 3. 加入0.15 ml TEMED
緩沖液梯度測序膠
1. 按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。 2. 在2個100 ml 燒杯中，配制緩沖液梯度凝膠溶液：50 ml 用0.5×TBE配制，25 ml 用2.5×TBE配制
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